L'isolamento del virus è un processo cruciale nella ricerca virologica, nella diagnostica clinica e nello sviluppo del vaccino. Una centrifuga refrigerata svolge un ruolo vitale in questo processo, consentendo la separazione delle particelle di virus da altri componenti in un campione. Come fornitore di centrifughi refrigerati di alta qualità, sono ben versato nelle procedure per l'utilizzo di questi strumenti nell'isolamento del virus. In questo blog, ti guiderò attraverso i passaggi specifici coinvolti.
1. Preparazione del campione
Prima di utilizzare la centrifuga refrigerata per l'isolamento del virus, è essenziale una corretta preparazione del campione.
Raccolta di campioni
Il primo passo è raccogliere i campioni appropriati. Questi possono includere fluidi biologici come sangue, saliva o omogena tissutali. Ad esempio, nel caso dei virus respiratori, vengono comunemente usati tamponi rinofaringei. Quando si raccolgono campioni, è necessario seguire rigide tecniche asettiche per prevenire la contaminazione.
Omogeneizzazione (se necessario)
Se il campione è un tessuto, potrebbe essere necessario omogeneizzato per rilasciare le particelle di virus. UNMixer omogeneizerpuò essere usato per questo scopo. L'omogeneizzazione abbatte la struttura dei tessuti e assicura che il virus sia distribuito uniformemente nella sospensione. Dopo l'omogeneizzazione, il campione viene generalmente filtrato attraverso un filtro a maglie fine per rimuovere i detriti grandi.
Aggiunta di buffer
I buffer appropriati vengono aggiunti al campione per mantenere l'equilibrio di pH e osmotici. Questi tamponi possono anche contenere inibitori della proteasi per prevenire la degradazione delle proteine del virus. La scelta del tampone dipende dal tipo di virus che viene isolato e dai successivi metodi di analisi.
2. Caricamento della centrifuga refrigerata
Una volta preparato il campione, è tempo di caricarlo nella centrifuga refrigerata.
Selezione del rotore giusto
Il primo passo nel caricamento della centrifuga è selezionare il rotore appropriato. Rotori diversi hanno capacità diverse e sono progettati per tipi specifici di campioni e requisiti di separazione. Per l'isolamento del virus, è possibile utilizzare un rotore ad angolo fisso o un rotore di secchio. I rotori ad angolo fisso sono più adatti per le particelle di virus in pellet, mentre i rotori di secchio oscillano sono migliori per la centrifugazione del gradiente di densità.
Bilanciamento dei campioni
Il bilanciamento è un passo fondamentale nell'uso di una centrifuga. I carichi sbilanciati possono causare vibrazioni eccessive, danneggiare la centrifuga e portare a risultati imprecisi. I campioni devono essere posizionati in tubi della stessa dimensione e riempiti allo stesso volume. Se necessario, i tubi fittizi riempiti con un volume uguale di buffer possono essere utilizzati per bilanciare il carico.
Caricamento dei tubi
Posizionare con cura i tubi bilanciati nelle fessure del rotore. Assicurarsi che i tubi siano adeguatamente seduti e fissati. Stringere il coperchio del rotore per evitare perdite durante la centrifugazione.
3. Impostazione dei parametri di centrifugazione
Il prossimo passo è impostare i parametri di centrifugazione appropriati sulla centrifuga refrigerata.
Velocità
La velocità di centrifugazione è determinata dalla dimensione e dalla densità delle particelle di virus. Generalmente, sono necessarie velocità più elevate per particelle di virus più piccole. Per i virus più comuni, vengono utilizzate velocità che vanno da 10.000 a 30.000 rivoluzioni al minuto (RPM). Tuttavia, per virus molto piccoli o per la centrifugazione del gradiente di densità, potrebbero essere necessarie velocità ancora più elevate.
Tempo
La durata della centrifugazione dipende anche dal virus e dal metodo di separazione. Sono usati tempi di centrifugazione più brevi per le fasi di chiarimento iniziale, mentre sono necessari tempi più lunghi per il pellet di particelle di virus. In genere, i tempi di centrifugazione possono variare da pochi minuti a diverse ore.
Temperatura
Poiché molti virus sono sensibili alla temperatura, una centrifuga refrigerata viene utilizzata per mantenere una bassa temperatura durante la centrifugazione. La temperatura è generalmente impostata tra 2 - 8 ° C per prevenire l'inattivazione del virus.
4. Processo di centrifugazione
Una volta impostati i parametri, avviare il processo di centrifugazione.
Monitoraggio della centrifuga
Durante la centrifugazione, è importante monitorare la centrifuga per garantire che funzioni senza intoppi. Verificare la presenza di rumori o vibrazioni insoliti, che possono indicare un carico sbilanciato o un problema meccanico. La maggior parte dei centrifughi refrigerati moderni sono dotati di sensori e allarmi per rilevare tali problemi.
Completamento della centrifugazione
Quando la centrifugazione è completa, la centrifuga si fermerà automaticamente. Aspetta che il rotore si fermi completo prima di aprire il coperchio della centrifuga. Questo è importante per prevenire qualsiasi fuoriuscita o danno ai campioni.
5. Post - Gestione della centrifugazione
Dopo la centrifugazione, i campioni devono essere gestiti con cura per ottenere il virus isolato.
Separazione del surnatante e del pellet
Se lo scopo della centrifugazione era di pellet di particelle del virus, rimuovere con cura il surnatante dal tubo usando unMicropipetta da 5000ul. Il surnatante contiene i componenti e i detriti solubili, mentre il pellet nella parte inferiore del tubo contiene le particelle di virus.
Risospensione del pellet
Il pellet virus viene quindi risospeso in un piccolo volume di tampone. Questo passaggio richiede delicata pipa per evitare di danneggiare le particelle del virus. Il virus risospeso può essere ulteriormente purificato o analizzato.
Controllo di qualità
È importante eseguire il controllo di qualità sul virus isolato. Ciò può includere la misurazione del titolo del virus usando tecniche come saggi di placca o reazione quantitativa a catena della polimerasi (QPCR). UNAnalizzatore di umidità per il ciboPuò anche essere utilizzato per garantire il adeguato contenuto di umidità dei campioni durante la memorizzazione.
6. Archiviazione del virus isolato
L'adeguata conservazione del virus isolato è fondamentale per mantenerne la vitalità.
Congelando il virus
Il virus isolato viene generalmente congelato a temperature ultra basse, come - 80 ° C o in azoto liquido. Il congelamento aiuta a preservare il virus per la conservazione a lungo termine. Tuttavia, è importante aggiungere crioprotettori alla sospensione del virus per prevenire danni durante il processo di congelamento.
Etichettatura e documentazione
Ogni campione di virus deve essere correttamente etichettato con informazioni come il nome del campione, la data di isolamento e il tipo di virus. La documentazione del processo di isolamento, compresi i parametri di centrifugazione e i risultati del controllo di qualità, è anche essenziale per il riferimento futuro.
Conclusione
L'uso di una centrifuga refrigerata nell'isolamento del virus comporta una serie di passaggi ben definiti, dalla preparazione del campione alla gestione e alla conservazione della centrifugazione post. Come fornitore di centrifughe refrigerati, comprendiamo l'importanza di fornire strumenti di alta qualità in grado di soddisfare i requisiti specifici dell'isolamento del virus. I nostri centrifughi sono progettati con funzionalità avanzate come un controllo preciso della temperatura, capacità ad alta velocità e interfacce in userico per garantire un isolamento del virus accurato ed efficiente.
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Riferimenti
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- Mahy, BWJ e Van Regenmortel, MHV (a cura di). (2009). Enciclopedia della scrivania della virologia generale. Academic Press.
- Murphy, FA, Fauquet, CM, Bishop, DHL, Ghabrial, SA, Jarvis, AW, Martelli, GP, ... & Zerbini, FM (2012). Tassonomia del virus: nono rapporto del Comitato internazionale per la tassonomia dei virus. Elsevier.